蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。酶標記工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。




酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，***盒測定，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致***作用，應注意防護。有條件者應使用不致***、靈敏度高的供氫體，生化***盒，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，***盒，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。




1、 ：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 ***勻漿：將***加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。




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